细胞与分子免疫学杂志 , Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology,
编辑部邮箱 , 2011年10期
【作者】 孔蕴； 郜海涛； 李树芳； 王鹏； 顾黎；

【Author】 KONG Yun1, GAO Hai-tao1, LI Shu-fang1, WANG Peng1, 2, GU Li1, 2* 1State Key Laboratory for Microbial Technology, School of Life Science, Shandong University; 2National Glycoengineering Research Center, Jinan 250100, China

【机构】 山东大学生命科学学院微生物技术国家重点实验室； 山东大学生命科学学院微生物技术国家重点实验室,国家糖工程技术研究中心；

【摘要】 目的:构建人乙酰半乳糖胺转移酶3可溶性区域(GALNT3-sol)的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化GALNT3-sol蛋白,制备小鼠抗人GALNT3-sol多克隆抗体,并对抗体的基本特性进行了检测。方法:RT-PCR扩增编码人GALNT3-sol的cDNA片段(1755bp),将其克隆至原核表达载体pET15b中,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,诱导表达人GALNT3-sol重组蛋白。将变性、复性和电泳纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗血清。分别采用ELISA和Western blot检测抗体的效价和特异性。结果:成功构建了pET15b/GALNT3-sol原核表达载体,转化BL21(DE3)后可高效表达重组蛋白GALNT3-sol,获得的小鼠抗人GALNT3-sol多克隆抗血清效价达1∶25600,并有良好的特异性。结论:成功获得人GALNT3-sol蛋白,得到了效价和特异性良好的小鼠抗人GALNT3-sol抗体,为进一步研究人GALNT3在肿瘤组织中的表达提供了可靠的材料。 更多还原

【Abstract】 AIM: In order to detect the expression of GALNT3 in various tumor tissues, the prokaryotic expression vector of human GALNT3-sol (a truncation of GALNT3 being deleted of the hydrophobic trans-membrane domain) was constructed, and then the recombinant GALNT3-sol protein was expressed and purified from E.coli, followed by the preparation of polyclonal antibody against GALNT3-sol and characterization of its properties. METHODS: The human cDNA of GALNT3-sol (1 755 bp)was amplified from MKN45 cell li... 更多还原
【关键词】 GALNT3； 大肠杆菌； 多克隆抗体；
【Key words】 GALNT3； E.coli； polyclonal antibody；
【基金】 国家重点基础研究发展计划(973)资助项目(2007CB914800);国家自然科学基金青年项目资助(31000368)【分类号】R392.11

中华医学之家：http://www.xinxi85.com

投稿信箱：zhyxzj85@163.com

联系电话：029--85327298     主编QQ：693891972