细胞与分子免疫学杂志 , Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology,
编辑部邮箱 , 2011年10期
 【作者】 张勋； 董英； 王云； 徐燕；

【机构】 江苏大学食品与生物工程学院；

【摘要】 目的:制备去氢甲睾酮(DMT)的单克隆抗体(mAb),为采用免疫法分析食品中该激素的残留提供基础。方法:通过采用碳二亚胺法合成的完全抗原DMT-KLH免疫BALB/c小鼠,经过效价测定,ELISA方法建立,细胞融合、筛选和亚克隆,建立了去氢甲睾酮mAb杂交瘤细胞株,并采用ELISA方法测定mAb纯化后的效价、IC50、交叉反应率和抗体亲和力等参数,以及对猪肉样品中的DMT加标含量进行测定。结果:经过3次亚克隆成功建立1株分泌去氢甲睾酮mAb的杂交瘤细胞株,纯化后抗体的蛋白浓度为0.87mg/mL,效价为1∶32000,IC50值为7.57μg/L,亲和常数为3.09×109L/mol与丙酸睾酮酯、群勃龙的交叉反应率均小于1%,猪肉样品中平均加标回收率为97.73%。结论:成功筛选到分泌DMT mAb的杂交瘤细胞株,并对其产生的mAb的效价、IC50值、特异性、稳定性、IgG亚类和亲和力等特性进行了鉴定,为下一步开展DMT免疫学检测方法研究奠定了基础。 更多还原

【关键词】 去氢甲睾酮； 碳二亚胺法； 间接酶联免疫； 单克隆抗体；
【基金】 “十一五国家科技支撑计划”课题(2006BAK02A08-13);江苏省自然科学基金资助项目(BK2008242);中国博士后科学基金资助项目(20070420974)【分类号】TQ467

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