细胞与分子免疫学杂志 , Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology,
编辑部邮箱 , 2011年10期
【作者】 孔桂美； 张小荣； 刁亚利； 吴克艳； 刘秋云； 卜平；

【Author】 KONG Gui-mei1, ZHANG Xiao-rong2, DIAO Ya-li3, WU Ke-yan1, LIU Qiu-yun2, BO Ping1* 1The Office of Clinical Combination of Traditional Chinese and Western Medicine, Department of Traditional Chinese Medicine, Medical School of Yangzhou University, Yangzhou 225001; 2Key Laboratory of Animal Infectious Disease; Ministry of Agriculture of the People’s Republic of China, Yangzhou 225009; 3The Department of Cardiothoracic Surgery, Second Affiliated Hospital, Yangzhou University, Yangzhou 225001, China

【机构】 扬州大学医学院中医系中西医结合临床教研室； 扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室； 扬州大学医学院附属第二医院胸心外科；

【摘要】 目的:研制人VEGF165单克隆抗体(mAb),为研究VEGF165的生物学活性提供基础。方法:应用RT-PCR从脐静脉内皮细胞中克隆人VEGF165基因,克隆入原核表达载体pGEX-6P1中获得重组表达载体pGEX-6P1-VEGF165,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达获得重组人VEGF165蛋白,将重组蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术,制备人VEGF165高效价的mAb。通过鸡胚血管形成抑制实验、HUVEC迁移抑制实验以及HUVEC血管形成抑制实验,对获得的人VEGF165特异性mAb进行进一步鉴定。结果:成功地从脐静脉血管内皮细胞中克隆出人VEGF165基因,并在大肠杆菌表达系统中获得高效表达,以纯化重组蛋白作为免疫原免疫小鼠,筛选获得5株分泌人VEGF165特异性mAb的杂交瘤细胞株,分别命名为5A6、3F5、6H3、7D10、7A10,其中5A6、3F5、6H3、7D10分泌的mAb亚类为IgG2a,7A10分泌的mAb亚类为IgG2b,抗体轻链均为κ链。5株mAb均能抑制鸡胚血管形成、抑制HUVEC迁移和及血管形成。结论:所获得的mAb具有效价高,活... 更多还原

【Abstract】 AIM: To prepare a monoclonal antibody against human vascular endothelial growth factor (VEGF165), for further study the VEGF165 in the tumorigenesis, tumor cell migration and the tumor cells escape from the immune response. METHODS: VEGF165 gene was cloned from the human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) by RT-PCR, and then cloned into the pGEX-6P1, constructed the prokaryotic expression of pGEX-6P1-VEGF165. The fusion -protein of VEGF165 was expressed in E.coli (BL21) induced by the 1.0 ... 更多还原
【关键词】 人VEGF165； 单克隆抗体； HUVEC； 血管形成； 细胞迁移；
【Key words】 human VEGF165； monoclonal antibody； HUVEC； angiogenesis； cell migration；
【基金】 国家自然科学基金资助项目(30801497);扬州大学研究生创新基金资助项目(2008)【分类号】R392.1

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