细胞与分子免疫学杂志 , Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology,
编辑部邮箱 , 2011年10期
【作者】 徐黎明； 尹成凯； 任桂萍； 田辉； 王雪琴； 丁良君； 李德山；

【Author】 XU Li-ming, YIN Cheng-kai, REN Gui-ping, TIAN Hui, WANG Xue-qin, DING Liang-jun, LI De-shan* Bio-pharmaceutical Lab, Life Science College, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China

【机构】 东北农业大学生命科学学院生物制药教研室；

【摘要】 目的:利用NlpA蛋白的前六个氨基酸(CDQSSS)将抗体锚定在细菌内膜建立筛选Fabs抗体库的展示技术,为今后抗体的研发工作奠定基础。方法:从pNAD质粒中克隆出NlpAleader(含有CDQSSS序列)基因序列,利用相应的酶切位点将该序列插入pComb3表达载体中构建成用于展示Fab的重组质粒pBFD。将从pEAI质粒克隆得到的anti-human IL-1β抗体的重链Fab和全长轻链分别插入到NlpAleader和pelBleader(pComb3载体自带的果胶酶基因前导肽)的下游。将pBFD-Fab转入到E.coli DH5α中诱导表达,原生质球制备后,采用梯度浓度的抗原进行孵育,最后经流式细胞术(FCM)检测抗体展示情况并且分选阳性群体,利用质粒提取的方法来替代PCR方法拯救阳性基因,转化E.coli DH5α,利用FCM再次检测该群体展示的抗体与抗原结合情况。结果:所展示的anti-hIL-1β Fab抗体依次与抗原和FITC标记的抗原特异性抗体孵育后,用FCM实时检测,结果显示出很强的荧光信号并且表现出抗原浓度依赖性。拯救出的pBFD-Fab-原生质球的FCM检测结果与... 更多还原

【Abstract】 AIM: To establish bacterial display technology for the purpose of Fab antibody library screening, by using six amino acids (CDQSSS) of the amino termimus of NlpA protein to anchore antibodies to the periplasmic side of the bacterial inner membrane. METHODS: The NlpA Leader sequences (encoding CDQSSS) was amplified from pNAD plasmid. The PCR product was subcloned into pComb3 expression vector to generate Fab display vector pBFD. The heavy chains of the Fab gene fragments and the light chains of t... 更多还原
【关键词】 细菌展示； Fab； 抗体库； 流式细胞仪筛选；
【Key words】 bacterial display； Fab； antibody library； flow cytometry screening；
【基金】 哈尔滨市科技创新人才发展计划资助(2006RFXXS002);东北农业大学创新团队发展计划资助(2006年);黑龙江省教育厅项目资助(200711521022);哈尔滨市科技创新人才研究专项资金(2008RFQXS017);国家自然科学基金资助项目(201031001084)【分类号】R392.11

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