细胞与分子免疫学杂志 , Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology,
编辑部邮箱 , 2011年10期
 【作者】 赵晶； 韩苏夏； 马瑾璐； 黄辰； 张丹；

【Author】 ZHAO Jing1, HAN Su-xia1*, MA Jin-lu1, HUANG Chen2, ZHANG Dan1 1Oncology Center of The First Affiliated Hospital, 2Central Laboratory, College of Medicine, Xi’an Jiaotong University, Xi’an 710061, China

【机构】 西安交通大学医学院第一附属医院肿瘤中心； 西安交通大学医学院中心实验室；

【摘要】 目的:设计并构建CDK1-shRNA质粒表达载体,转染肝癌HepG2细胞,验证shRNA对肝癌HepG2细胞CDK1基因的沉默效应,便于进一步研究CDK1的功能。方法:设计针对CDK1mRNA靶序列的小发夹状RNA,化学合成含茎环结构的正义链与反义链,退火形成带内切酶粘/平末端的双链后,与酶切后的 pSIREN-RetroQ-ZsGreen载体片段进行连接、转化。经测序等方法鉴定重组克隆。将重组载体质粒经脂质体包裹转染肝癌HepG2细胞,realtime PCR及Western blot检测RNA干扰效果。结果:重组克隆经测序证实插入的序列正确,realtime PCR及Western blot检测证实设计的3条RNA干扰序列有效沉默了肝癌HepG2细胞中的内源性CDK1。结论:所制备的CDK1-shRNA在肝癌HepG2细胞中可获得高效转染,并能产生特异性的基因沉默效应,以CDK1为靶向的shRNA能够有效下调CDK1基因的表达,对周期依赖激酶CDK1功能的研究奠定基础。 更多还原

【Abstract】 AIM: To construct three adenoviral vectors harboring shRNA targeting CDK1 gene, and identify its inhibitory effect on the gene expression of CDK1 in hepatoma carcinoma HepG2 cells. METHODS: Three shRNA sequences targeting CDK1 mRNA were designed. The shRNA sequences were annealed and linked with linearized pSIREN-RetroQ-ZsGreen. The recombinants were identified by PCR and DNA sequencing. CDK1-shRNA plasmid was then transfected into the cultured HepG2 cell line with lipofectamine 2000. RT-PCR and... 更多还原
【关键词】 shRNA； CDK1； 基因沉默； 肝癌细胞；
【Key words】 shRNA； CDK1； gene silencing； hepatocarcinoma cell；
【基金】 国家自然科学基金资助项目(81071692)【分类号】R735.7

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