千层塔中Ⅲ型聚酮合酶基因的克隆、表达与功能鉴定
Cloning,expression and functional identification of a type Ⅲ polyketide synthase gene from Huperzia serrata推荐 CAJ下载 PDF下载 不支持迅雷等下载工具，请取消加速工具后下载。
药学学报 , Acta Pharmaceutica Sinica,
编辑部邮箱 , 2011年10期 【作者】 叶金翠； 张萍； 孙洁胤； 郭潮潭； 陈国神； 阿部郁朗； 野口博司；

【Author】 YE Jin-cui1,ZHANG Ping1,SUN Jie-yin1,GUO Chao-tan1,CHEN Guo-shen1, ABE Ikuro2,NOGUCHI Hiroshi2(1.Institute of Materia Medica,Zhejiang Academy of Medical Sciences,Hangzhou,310013,China; 2.School of Pharmaceutical Sciences,University of Shizuoka,Shizuoka,Japan)

【机构】 浙江省医学科学院药物研究所； 日本静冈县立大学药学院；

【摘要】 Ⅲ型聚酮合酶是以合成聚酮类化合物为主的一类重要生物合成酶。本文利用逆转录聚合酶链反应从中草药千层塔新鲜嫩叶中扩增聚酮合酶基因,得到一个Ⅲ型聚酮合酶全长cDNA。该基因全长1212 bp,编码404个氨基酸。与已知的其他植物来源的聚酮合酶氨基酸序列有约50%～66%的同源性。cDNA经双酶切后克隆至pQE81L,并导入大肠杆菌(E.coli)M15中表达,产生大量带寡聚组氨酸标记的重组酶,重组酶分子质量大小约为46.4 kDa。酶活性鉴定研究表明,该重组酶可催化芳香族底物、脂肪族底物生成系列非天然聚酮产物,尤其是其可催化N-甲基邻氨基苯甲酰CoA和丙二酰CoA生成1,3-二羟基-N-甲基-吖啶酮,吖啶酮生物碱一直被认为只能由吖啶酮合酶合成。该工作为研究千层塔中Ⅲ型聚酮合酶在天然药物石杉碱甲生物合成中的作用奠定基础。 更多还原

【Abstract】 A cDNA encoding novel type Ⅲ polyketide synthase(PKS) was cloned and sequenced from young leaves of Chinese club moss Huperzia serrata(Thunb.) Trev.by RT-PCR using degenerated primers based on the conserved sequences of known CHSs,and named as H.serrata PKS2.The terminal sequences of cDNA were obtained by the 3’-and 5’-RACE method.The full-length cDNA of H.serrata PKS2 contained a 1 212 bp open reading frame encoding a 46.4 kDa protein with 404 amino acids.The deduced amino acid sequence of H.se... 更多还原
【关键词】 千层塔； Ⅲ型聚酮合酶； 基因克隆；
【Key words】 Huperzia serrata； type Ⅲ polyketide synthase； gene expression；
【基金】 浙江省自然科学基金资助项目(Y208631);浙江省卫生厅项目(2008A003)【分类号】R284

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