临床检验杂志 , Chinese Journal of Clinical Laboratory Science,
编辑部邮箱 , 2011年06期
【作者】 高峰； 陈亚军； 杨学文；

【Author】 GAO Feng,CHEN Ya-jun,YANG Xue-wen(Department of Laboratory Medicine of Jiangsu Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine,Nanjing 210029,Jiangsu,China)

【机构】 江苏省中医院检验科；

【摘要】 目的构建HSP70启动子与绿色荧光蛋白重组真核表达载体,并在人Chang’s肝细胞表达,建立一种新的体外药物肝毒性早期预测细胞模型。方法提取人Chang’s肝细胞基因组DNA,钓取HSP70启动子基因,构建重组载体,经脂质体转染人Chang’s肝细胞,用G418筛选稳定转染细胞,用荧光显微镜观察绿色荧光表达情况,用实时荧光定量PCR检测EGFP基因表达量的变化。结果成功钓取HSP70启动子基因并导入真核表达载体pEGFP-N1;G418以300 ng/mL的终浓度筛选出稳定转染的单克隆细胞;荧光显微镜观察到肝毒性药物酮康唑刺激人Chang’s肝细胞后,可诱导HSP70启动子调控增强型绿色荧光蛋白发出绿色荧光,药物刺激组EGFP mRNA相对表达量与正常对照组比较有统计学意义(t=-14.21,P<0.05)。结论成功构建HSP70启动子与绿色荧光蛋白共表达真核表达载体,获得稳定转染单克隆细胞,并证实HSP70在肝毒性药物刺激下的应激表达,为建立新的体外药物肝毒性早期预测细胞模型进行高通量筛选新药奠定了基础。 更多还原

【Abstract】 Objective To construct the eukaryotic expression vector of HSP70 promoter and green fluorescent protein and expression the recombine proteins in human Chang′s liver cells in order to establish a new drugs hepatotoxicity cell model in vitro for early prediction.Method The genome DNA of human Chang′s liver cell was extracted and the promoter of HSP70 gene was obtained.HSP70 promoter gene was transfected to human Chang′s liver cell by means of pEGFP-N1 vector with liposome.The steadily transfected ... 更多还原
【关键词】 热激蛋白； 启动子； 人Chang’s肝细胞； 基因重组；
【Key words】 heat shock protein； promoter； human Chang′s liver cell； gene recombination；
【分类号】R575

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