【摘要】  目的：观察大理百合多糖(Lilium polysaccharide,LP)对小鼠免疫功能的影响。方法：昆明种小白鼠每天分别腹腔注射给药(ip)LP 100 mg·kg-1.BW，150 mg·kg-1.BW，300 mg·kg-1.BW，对照组则给等量生理盐水(NS)，连续14天后，观察LP对小鼠免疫功能的影响。结果：LP能显著增加小鼠免疫器官重量,促进小鼠单核巨噬细胞的吞噬功能,提高小鼠血清溶血素的生成，能明显促进ConA诱导的淋巴细胞增殖转化,能显著提高小鼠NK细胞活性。结论：LP对小鼠免疫功能能有显著促进作用。

【关键词】  百合多糖(LP);免疫功能

Email:luanyuquan@sina.com 百合(Lilium brownii F.E.Brown var. Colchesteri Wils)为百合科百合属多年生草本植物，全球约有80余种，我国分布40余种。大理百合(Lilium bakeriamum Collett et Hemsl. Var delavayi (Franch) Wilson) 为百合科百合属植物，性味甘寒，具有养阴清肺、清心安神之功效。

　　多糖是一类结构复杂的生物大分子物质，广泛分布于植物、动物、微生物等有机体中。多糖不仅是细胞的基本组成成分，还广泛参与细胞识别、细胞生长、分化、免疫应答等多种复杂而广泛的生理活动。研究表明[1]，不同来源的多糖具有增强机体免疫力、调节血糖、降血脂及抗肿瘤、抗病毒、抗氧化等多种生物学活性,已成为现代药学和功能性食品研究的热点之一。目前有关大理百合多糖的研究尚未见报道[2]，为进一步观察大理其生理活性和药理学作用，我们对其免疫学活性进行了初步实验研究, 现将实验结果报道如下。

　　1 材料与方法

　　1.1 主要仪器与试剂

　　岛津UV-2600型紫外可见分光光度计，BioTeck全自动酶标仪、LD大容量冷冻离心机。Sephadex G-150，RPMI 1640培养液，刀豆蛋白A(ConA)、MTT等均为sigma公司产品。其余试剂为国产分析纯。

　　1.2动物

　　昆明种小白鼠，体重20±2g，由昆明医学院实验动物中心提供，动物合格证号：滇实动证第2003056号。

　　1.3 药物

　　大理百合多糖(Lilium polysaccharide, LP))，由大理学院基础医学院生物化学实验室提供，为白色粉末。将LP用灭菌生理盐水制成5 mg·mL-1, 过滤除菌，置4℃备用。

　　2实验方法

　　2.1LP对小鼠脏器/体重比值(胸腺指数和脾指数) 的影响

　　取小鼠40只，随机分成4组，每组10只。LP低、中、高剂量组每天分别腹腔注射给药(见表1)，对照组则给等量生理盐水(NS)，连续14天。于末次给药后24h，称小鼠重，颈椎脱臼法处死小鼠，取出脾脏及胸腺，用滤纸吸干血迹后称重。计算胸腺指数和脾指数：脏器(mg)/体重(10g)。

　　2.2LP对小鼠血液碳粒廓清速率的影响

　　取小鼠40只，分组给药同前，连续14天。于末次给药24h后，称重，各鼠尾静脉注入印度墨汁，每10g体重0.1 mL，于注入墨汁后第2、10min，分别眼内眦静脉丛取血20μL，测定小鼠血液碳粒廓清速率，用半自动生化仪以600 nm波长测光密度值(OD)。小鼠处死，取肝、脾脏，称重。计算吞噬指数a。a=K1/3×体重/(肝重+脾重);K=(lgOD1-lgOD2)/(t2-t1)

　　2.3LP对小鼠血清溶血素的影响(血凝法)

　　取小鼠40只，分组给药同前，连续14天。于给药的第10天各鼠腹腔注射0.2mL的2% (v/v)绵羊红细胞悬液致敏(当日给药改为皮下注射)。免疫5天后，小鼠眼球取血，分离、收集血清。用生理盐水将血清倍比稀释，置于微量血凝板内，每孔100μL，加入100μL0.5%(v/v)的绵羊红细胞悬液， 37℃温箱孵育3h，观察血球凝集程度。计算抗体积数：抗体积数=(S1+2 S2+ S3……nSn);式中1、2、3……n为对倍稀释的指数，S为凝集程度的级别。

　　2.4LP对体外ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化的影响(MTT法)

　　取小鼠40只，分组给药同前，连续14天。于末次给药24h后，处死小鼠，无菌取脾，制细胞悬液，计数活细胞数，用RPMI1640培养液调整细胞浓度为3×106个/mL。将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1mL，其中一孔加75μL ConA液(相当于7.5μg/mL)，另一孔作对照，置5%CO2，37℃孵箱中培养72h，然后用MTT法测定细胞活性，以570nm波长测定光密度值。淋巴细胞的增殖能力用加ConA孔的光密度值减去不加ConA孔的光密度值表示。

　　2.5 LP对小鼠NK细胞活性的影响(LDH测定法)

　　小鼠40只，分组给药同前，连续14天。于末次给药24h后，处死小鼠，无菌取脾，制成脾细胞悬液，裂解红细胞后，用含10%小牛血清的RPMI1640完全培养液重悬，台酚兰染色计数活细胞数，最后用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为 2×107个/mL，此为效应细胞。取传代后24h生长良好的YAC-1细胞，用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为4×105个/mL，此为靶细胞。取靶细胞和效应细胞各100μL(效靶比50:1)，加入96孔培养板处理;用LDH法测定NK细胞活性。

　　3 统计处理

　　用SPSS统计软件进行方差分析，结果用x±s±s表示。P<0.05为差异显著。

        4 实验结果

　　4.1 对小鼠免疫器官脏器/体重比值的影响

　　结果见表1。由表1可见，与对照组比较，脾脏指数有显著性差异(P<0.05)，LP高剂量组的胸腺指数与对照组相比，有显著性差异(P<0.05)，但LP中、低剂量对小鼠胸腺指数无某些影响(P>0.05)。表1增强免疫力功能试验小鼠的免疫器官脏器/体重比8注：与对照组比较**P<0.01;*P<0.05。4.2LP对小鼠血液碳粒廓清速率、脾淋巴细胞转化能力和血清溶血素的影响

　　结果如表2所示。从表2可见，LP高、中剂量组的吞噬指数和脾淋巴细胞转化能力均高于对照组，P<0.05。LP高、中剂量组的抗体积数均高于对照组，表明具有提高小鼠的血清溶血素水平的作用。LP低剂量组与对照组相比，无显著性差异(P>0.05)。表2 LP对小鼠碳廓清功能的影响注：与对照组比较**P<0.01;*P<0.05。4.3 LP对小鼠NK细胞活性的影响

　　结果如表3所示，LP各剂量组的NK细胞活性均高于对照组，差异均具有显著性(P<0.05)。表3LP对小鼠NK细胞活性影响

　　5 讨论

　　植物来源的多糖作为一种潜在的新药资源,其最大的特点是具有独特的生理活性和低毒副效应，因而在临床实际应用有较广阔的应用前景，已引起医药学界的高度重视。目前已有百余种植物多糖被分离提取出来。其中部分已应用临床，如香菇多糖、云芝多糖、灰树花多糖、裂隙葡多糖、牛膝多糖等。但由于多糖本身的原因,如多糖的结构太复杂,其质量标准不易控制,有些多糖在天然产物中含量很低而不易分离，同时多糖的药理活性和多种因素有关等,给多糖的研究和临床应用带来了一定的限制。因此，在规范多糖的提取方法,搞清多糖的构效关系,探讨多糖的药理作用机制方面进行深入研究。

　　我国百合资源较丰富，但对百合多糖的研究起步较晚,且主要集中在分离纯化方法及生物学活性研究方面，对其化学结构的研究报道较少。特别是其高级结构与药理作用关系、其作用机制等方面的研究尚未见报道[2]，有待开展更深入的研究工作。随着对百合多糖研究的不断深入,百合多糖将会有较好的临床实际应用前景。

【参考文献】
  　　1 朱欣婷.植物多糖的生物活性研究进展[J] .安徽农业科学，2008, 36(28): 12076-12077.

　　2 任利君.刘俊田.弥曼,等，百合多糖的研究进展[J] .西北药学杂志，2005, 20(6): 284-285.