【摘要】  目的：研究归芪合剂联合缬沙坦对2型糖尿病(T2DM)大鼠肾脏功能的保护作用。方法：建立T2DM大鼠模型，给予归芪合剂联合缬沙坦灌胃治疗12周，测定大鼠空腹血糖(FBG)、血脂(TG)、总胆固醇(TC)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的水平;测定胰岛素敏感指数(ISI)、肾脏肥大指数(KW/BW)和肾皮质钠钾ATP酶活性。结果：①与正常对照组比较，T2DM模型组大鼠FBG、TG、TC、MDA和KW/BW显著升高，SOD、ISI和肾皮质钠钾ATP酶活性显著降低;②与T2DM模型组比较，治疗组大鼠FBG、TG、TC、MDA和KW/BW显著降低，SOD、ISI和肾皮质钠钾ATP酶活性显著升高。结论：归芪合剂联合缬沙坦对T2DM大鼠肾脏功能具有明显保护作用，其机制可能与降低糖尿病大鼠血糖血脂，提高机体抗氧化应急能力和改善肾脏局部血循环有关。

【关键词】  归芪合剂;缬沙坦;2型糖尿病;肾脏功能;保护

近年来，由于肥胖人群数量的快速增加，2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus, T2DM)发病率呈快速上升趋势，目前估计全球患病人数超过1.5亿人，国内患者约4500万。据研究证实，糖尿病早期肾脏功能就受到影响，并逐渐加重，约1/3的患者最终发展成糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)。由于现代临床很难发现糖尿病(diabetes mellitus, DM)早期对肾脏的损害，所以研究DM早期肾脏功能的防治具有极其重要的价值。我国传统中药当归、黄芪具有降低血糖血脂，提高机体抗氧化应急能力等多种功效[1]，而现代西药缬沙坦能够降低血压，改善机体局部血液循环。本实验运用中西药物结合的方法，用归芪合剂联合缬沙坦灌胃治疗T2DM大鼠12w，观察该方案对模型大鼠肾脏功能与结构的保护作用。

　　1 材料和方法

　　1.1 主要试剂与仪器

　　链脲佐菌素(STZ, sigma)，血糖、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及钠钾ATP酶检测试剂盒(南京建成生物公司)，胰岛素放射免疫检测试剂盒(北京北方生物技术研究所)，缬沙坦(海南皇隆制药厂)。快速血糖测定仪(三诺SXT1型，长沙)。

　　1.2 动物及饲料

　　3月龄雄性Wistar大鼠，一级，体质量为195±16g。常规饲料：57%碳水化合物，22%蛋白质，6%脂肪，8%纤维素，7%其它成分。高能饲料(60%常规饲料，20%蔗糖，15%猪油，5%胆固醇)。动物及饲料均由四川省医学科学院实验动物研究所提供，动物合格证号：SCXK(川)2004-15。

　　1.3 动物模型建立与分组

　　T2DM大鼠模型和正常对照组的建立参照本实验室以前的方法[2]，4w高能饲料喂养，空腹12h后给予25mg·kg-1的STZ一次性尾静脉注射(STZ注射前用pH=4.2的柠檬酸缓冲液配成1%浓度)，继续高能饲料喂养4w，然后采尾静脉血测定空腹血糖(FBG)、血清胰岛素(FINS)，并计算胰岛素敏感指数(ISI)，最后选取符合T2DM条件的20只大鼠作为T2DM模型，其余淘汰。实验动物设立三组：正常对照组(A)、模型对照组(B)、治疗组(C)。治疗组用含缬沙坦的归芪合剂(黄芪50g、当归30g浓煎200m1，冷却过滤后加入碾细的缬沙坦粉末200mg混匀)，每天10mg·kg-1灌胃治疗，对照组每次等量生理盐水溶液灌胃。在治疗期间，全部大鼠都用常规饲料喂养，自由饮水。实验动物于治疗12w末空腹12h，然后从心脏采血制备血浆和血清标本-70℃保存待测，断髓处死动物，摘取右侧肾脏，去包膜后用滤纸吸干水分称重，将右肾质量与体质量之比作为肾脏肥大指数(KW/BW)。左侧肾脏取其皮质液氮保存用于钠钾ATP酶活性测定(实验中途死亡2只动物)。

　　1.4 生化及放免检测

　　血糖采用快速血糖测定仪测定，TG、TC、SOD和MDA 的检测严格按照说明书操作，采用751分光光度计，FINS测定采用放射免疫分析法。

　　1.5 肾皮质钠钾ATP酶活性测定

　　取每只实验大鼠0.3g肾皮质置于玻璃皿中，加入9倍体积的冷生理盐水，在冰浴条件下剪碎并匀浆处理，取10%匀浆4000rpm离心15min，取上清液用定磷法按试剂盒说明书测定，样品中总蛋白含量用考马斯亮兰法测定。钠钾ATP酶活性以每毫克肾皮质组织总蛋白中钠钾ATP酶每小时分解ATP产生的无机磷(Pi)的量表示(μmol·mg-1 ·h-1)。

　　1.6 统计学处理

　　数据均以x±s表示，采用SPSS10.0软件行双侧t检验和单因素方差分析，以P<0.05作为统计学检验标准。

　　2 结果

　　2.1 实验大鼠的一般症状和体征变化

　　与正常对照组大鼠比较，建立的T2DM模型大鼠体重明显增加，并出现腹型肥胖，多饮，多尿，多食的症状，毛发色泽黯淡，精神萎靡，活动减少，随着病程延长，除大鼠体重呈下降趋势外，其它症状逐渐加重;与模型对照组大鼠比较，归芪合剂联合缬沙坦治疗12w后，上述症状体征得到明显改善。

　　2.2 实验大鼠血糖血脂和肾脏肥大指数的变化

　　表1可见，与正常对照组比较，糖尿病模型对照组大鼠FBG、TC、TG水平显著升高(P<0.01)，肾脏肥大指数显著增大(P<0.05);与模型对照组比较，治疗组大鼠12w后，FBG、TC、TG水平显著下降(P<0.01)，肾脏肥大指数显著降低(P<0.05)。表1实验大鼠血清FBG、TC、TG和肾脏肥大指数的变化 注：与相应对照组比较，△P<0.05，△△P<0.01。2.3 药物治疗对实验大鼠血浆SOD、MDA水平的影响

　　表2可见，与正常对照组比较，糖尿病模型对照组大鼠血浆SOD水平显著降低(P<0.01)，MDA水平显著升高(P<0.01);与模型对照组比较，治疗组12w后，大鼠血浆SOD水平显著升高(P<0.01)，MDA水平显著降低(P<0.01)。

　　2.4 实验大鼠血清胰岛素和胰岛素敏感指数的变化

　　表3可见，与正常对照组比较，糖尿病模型对照组大鼠血清FINS水平显著升高(P<0.01)，ISI显著降低(P<0.05);与糖尿病模型对照组比较，药物治疗12w后，大鼠血清FINS水平显著降低(P<0.05)，ISI显著升高(P<0.05)。表2实验大鼠血浆SOD与MDA水平的变化

　　 2.5 药物治疗对糖尿病大鼠肾皮质钠泵活性的影响

　　与正常对照组比较，12w后模型对照组大鼠肾皮质钠钾ATP酶活性显著降低(P<0.01);与糖尿病模型对照组比较，治疗组12w后，肾皮质钠钾ATP酶活性显著升高(P<0.01)，见表3。

　　3 讨论

　　成功复制T2DM动物模型是研究的关键，从本实验的结果看，疾病模型大鼠具有中度高血糖，高血脂，胰岛素敏感性显著下降，血清胰岛素水平不低，同时还具有多饮多食多尿和精神活动下降的症状，这与人类T2DM十分类似，据此认为建立的动物模型是可信的。

　　T2DM主要是通过长期的高血糖高血脂对微小血管造成损伤。归芪合剂含有多种有效成分，包含黄芪皂苷，黄芪多糖、当归多糖、黄酮类、多种氨基酸、维生素，及硒、硅、钼等微量元素[3]。研究表明，归芪合剂具有扩张血管、降低血糖血脂，增加肾脏血流量，改善肾脏微循环等作用[1]。实验结果表明，糖尿病大鼠经过灌胃治疗12w后，血糖、血脂和总胆固醇水平显著降低，胰岛素敏感性显著升高，多饮多食多尿和精神活动下降的症状得到显著改善，说明改组药物对T2DM模型大鼠具有明显疗效。

　　据报道，高血糖可与SOD 活性中心的赖氨酸结合，产生糖化反应，使SOD 活性下降[4]，抑制自由基的清除。氧自由基通过攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸，引发脂质过氧化作用，并因此形成脂质过氧化物，如MDA、酮基、羟基等，进而引起细胞代谢及功能障碍。因此，本实验通过测定大鼠血浆SOD和MDA水平，了解动物体内氧化与抗氧化能力。实验结果显示疾病模型大鼠氧化应急能力增强，而抗氧化能力减弱，同时也表明归芪合剂联合缬沙坦治疗能够提高糖尿病大鼠机体的抗氧化应急能力。

　　黄芪富含微量元素硒，对肾小球基底膜的电荷屏障和机械屏障均有保护作用[5]。缬沙坦是血管紧张素Ⅱ(AⅡ)受体特异性拮抗剂，可以降低肾皮质转化生长因子(TGFβ1)及其Ⅱ型受体mRNA的表达，扩张肾脏血管，改善局部血液循环;还能降低血肌苷和血尿素氮水平，减轻肾脏肥大，抑制细胞外基质积聚，延缓DN的发展[6]。实验通过检测肾脏肥大指数和肾皮质钠钾ATP酶的活性，了解药物对肾脏结构和功能的保护作用。实验结果显示糖尿病大鼠12w时，肾脏结构和功能已经发生显著改变，治疗组的结构表明该方案对T2DM大鼠肾脏形态结构，特别是功能蛋白具有显著的保护作用。

　　总之，归芪合剂联合缬沙坦对T2DM大鼠肾脏结构和功能具有显著保护作用，其机制可能主要是通过降低糖尿病大鼠血糖血脂，提高动物抗氧化应急能力和扩张血管，降低血压，改善肾脏局部组织血液循环有关。

【参考文献】
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　　4 杨兰泽, 高静, 付建斌等. NIDDM患者血清Lpo、SOD、NO和GHb检测及其临床意义[J].中国慢性病预防与控制, 2000, 8(3): 137-138.

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　　6郭志新, 邱明才. 氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏转化生长因子p及其Ⅱ型受体表达的影响及机制[J].中国糖尿病杂志, 2003, 11(6): 421-422.