【摘要】  目的探讨黄连等12种中药杀灭齿龈内阿米巴(Entamoeba gingivalis,E.g.)的效果。方法2种中药分别制备50%醇提浸膏和水提浸膏，采用同一浓度进行体外抗齿龈内阿米巴实验，用光镜观察药物作用后齿龈内阿米巴的形态变化，初步筛选出杀虫作用较强的药物。然后对具有较强杀虫效果的药物，稀释为不同浓度进一步进行筛选。结果石榴皮水提物、青蒿水提物、黄柏醇提物和黄连水提物均显示出明显的抗E.g.的作用。当浓度稀释为1∶32时，青蒿水提物只用18h即能杀死所有虫体，而其他提取物在两天时间内均未能杀死所有虫体。结论在被筛选的12种中药中，青蒿水提物杀虫作用最佳。

【关键词】  齿龈内阿米巴; 中药筛选; 杀虫效果

　齿龈内阿米巴(Entamoeba gingivalis，E.g.)是单个细胞的动物，是一种人体常见寄生虫，主要寄生于人体口腔，可引起牙龈炎和牙周炎等口腔疾患。一些学者研究表明，甲硝唑和替硝唑杀灭E.g.效果较好[1]，但临床实践显示，甲硝唑和替硝唑可引起严重的胃肠反应，甚至有致畸和致癌等毒副作用。为了发现新的抗E.g.药物, 本文选用了具有杀虫、消炎和抗菌作用的12种中药[2～4 ] , 分别进行了体外杀灭E.g.的实验观察。现将结果报道如下。

　　1 材料与方法

　　1.1 药物制备

　　1.1.1 50%醇提浸膏的制备从国大药房购得蛇床子、石榴皮、黄连、大黄、丁香、百部、苦参、花椒、白头翁、黄柏、青蒿、槟榔等原料药，并经鉴定符合药典规定[5]。每种中药取样量15g，加10倍量50%乙醇冷浸1h，水浴回流提取2h，过滤，滤渣继续加8倍量50%乙醇，水浴回流提取2 h，过滤，滤渣加5倍量50%乙醇，水浴回流1h，过滤，弃去残渣，合并3次提取物。旋转蒸发仪回收溶剂。浓缩物置于蒸发皿中水浴挥发至无醇味，称量浸膏重量并计算得率。密封放置于冰箱中冷藏备用。

　　1.1.2 水提浸膏的制备每种中药取样量约15 g，加10倍量纯净水冷浸1 h，煎煮提取2 h，过滤，滤渣继续加8倍量纯净水，煎煮提取2 h，过滤，滤渣加5倍量纯净水，煎煮1 h，过滤，弃去残渣，合并3次提取物。旋转蒸发仪浓缩至适量。称量浸膏重量并计算得率。置于蒸发皿中水浴挥发至膏状，密封放置于冰箱中冷藏备用。

　　1.2 E.g.标本的获取取消毒牙签，从已证实E.g. 为阳性的学生口腔取出牙垢，然后把牙垢洗至装有Lock' s液的试管中，如有成团的牙垢，则用玻棒将其散开，检查虫体的密度和质量，符合实验要求后将其置37℃温箱备用。

　　1.3 杀虫实验

　　1.3.1 初筛用灭菌蒸馏水将50%醇提浸膏和水提浸膏稀释为浓度50%的药液(即浓度为1∶2)，各取2 ml，分别加入不同的灭菌试管中，然后再向各管加入等量的含虫悬液孵育。对照组则以2 ml Lock' s液代替药物。观察24 h。

　　1.3.2 复筛将初筛有效的4种药液，分别按1∶4，1∶8，1∶16，1∶32和1∶64的浓度进行稀释，并以Lock' s液作空白对照进行杀虫实验，观察2d。

　　1.3.3 虫体死亡判断和死亡率计算于不同孵育时间吸取各管沉淀于试管底部的培养物滴于载玻片上，覆上盖玻片，在高倍镜下观察上下左右及中央五点的50个虫体(虫量少的则观察全涂片)，分别统计活虫、死虫数量，并计算死亡率。若虫体变圆、虫体轮廓模糊, 边缘不整, 失去原有的透明度, 细胞核和细胞器消失，内含大量颗粒者判定为死亡。死亡率(% ) = 死亡虫数/ 观察的虫数×100%

　　2 结果

　　初筛实验进行2 h后显微镜下观察，对照组虫体活泼呈不规则形，伪足伸展1至数个，伸出的伪足无色透明，伪足伸出方向不定，运动有力。而被蛇床子、石榴皮、黄连、大黄、百部、黄柏和青蒿孵育的虫体运动缓慢，伪足伸出渐减少，甚至消失，虫体渐成近圆形，一些虫体由透明渐呈颗粒状、颜色变暗，甚至有些虫体被染成淡黄褐色，开始出现死亡虫体。但以丁香、苦参、花椒、白头翁、槟榔提取物处理的虫体大多活力较好，只有少数活动减慢，几乎看不到死亡的虫体。用药4 h后，有两种药物的提取物即石榴皮水提物、青蒿水提物孵育的虫体全部死亡。黄柏醇提物和黄连水提物孵育的虫体则在6 h后死亡。初筛结果表明，石榴皮水提物和醇提物、黄连水提物和醇提物、黄柏醇提物、青蒿水提物抗E.g.效果最好，蛇床子、大黄、丁香、百部、花椒次之，槟榔、苦参和白头翁杀虫效果较差。其中石榴皮水提物、青蒿水提物、黄柏醇提物和黄连水提物显示出最明显的抗E.g.的作用。见表1。表1 12种中药体外杀E.g.结果从复筛结果来看，当石榴皮水提物、青蒿水提物、黄柏醇提物和黄连水提物的浓度为1∶2时，用药后12 h内均能全部杀死虫体。当浓度稀释至1∶4时，石榴皮水提物、青蒿水提物和黄连水提物仍然可以在1 d内杀灭所有虫体。在复筛的4种药物中，青蒿显示出最强的杀虫效果，浓度达到1∶32用药18 h后仍能使虫体死亡率达100%，且效果相当稳定。见表2。表2 4种中药不同浓度体外杀E.g.结果

　　3 讨论

　　由于过去许多学者认为E.g.与人体之间为片利共生关系，对人体无危害，所以20世纪之前关于E.g.防治研究方面的报道较少。但近年越来越多的学者通过流行病学调查显示，E.g.感染与口腔疾患相关[6，7]，陈金富等[8]还对其致病作用和致病机制进行了初步研究，研究结果表明E.g.感染产生较多氧自由基可使细胞膜组织溶解与受损，以及口腔共生菌的协同作用使免疫力低下的宿主发生口腔疾病。随之对E.g.的研究得到了重视，一些学者如刘光英等[1]曾进行甲硝唑、替硝唑及中药大蒜、八仙花等体外杀灭E.g.实验，结果显示大蒜、八仙花等均有一定的杀虫作用。但大蒜头提取物常常丧失杀虫作用，生食因为味辣使一些人难以接受，而八仙花的毒性较强，所以应用大蒜、八仙花杀虫都不是很理想。本研究首次选用青蒿、黄连等12种中药的水提浸膏和醇提浸膏进行杀E.g.实验，经过初筛和复筛实验，显示石榴皮水提物、黄连水提物、黄柏醇提物、青蒿水提物均有较强的杀虫效果，其中以青蒿水提物效果最好。

　　实验过程中应注意以下两方面的问题：一是由于温度直接影响虫体的活力，所以滴片后要及时在显微镜下观察虫体活动状况，尤其是室温较低的情况下更应如此。当然室温能保持在25～30℃最好。二是在培养管中，E.g.只沉积在试管的底部，所以向实验各管分配含虫悬液前应充分混匀。

　　本研究为开发中药防治齿龈内阿米巴病打下初步基础，今后应进一步研究分析石榴皮、黄连、黄柏、青蒿的有效成分，并深入研究采用单方或复方提高疗效。

【参考文献】
  　[1] 刘光英,陈金富,李常春,等.杀灭齿龈内阿米巴的药物实验研究[J].中国人兽共患病杂志，2002,18(5)：108.

　　[2] 高学敏.中药学[M].北京：中医药出版社，2007.

　　[3] 闫 艳,高兴政. 白头翁体外抗阴道毛滴虫透射电镜观察[J]. 中国病原生物学杂志，2006，1(1)：22.

　　[4] 苏水莲,陈桂凤,张瑞其,等.石榴根皮等9种中药体外抗人芽囊原虫的效果观察[J]. 时珍国医国药，2007，18(3)：616.

　　[5] 国家药典委员会.中国药典[S].北京：化学工业出版社，2000.

　　[6] 梁裕芬,周德喜.某高校大学生常见寄生虫感染情况调查[J].中国学校卫生,2007,28(1):28.

　　[7] 罗新萍.洛阳市不同人群阴道毛滴虫感染情况调查[J].中国寄生虫病防治杂志,2003,16(2):104.

　　[8] 陈金富，刘光英，陈文列，等.龈内阿米巴的致病作用与致病机制的研究[J].寄生虫与医学昆虫学报，2002，9(3)：59.