【摘要】  目的: 建立测定清肝利胆口服液中厚朴酚、和厚朴酚含量的高效液相色谱法。方法：色谱柱为Agela Promosil C18(250mm×4.6mm，5μm);流动相为甲醇乙腈0.1%磷酸溶液(50：20：30),检测波长为294 nm;柱温为35 ℃;流速为1.0 mL·min-1。结果：厚朴酚的线性范围为0.2558～1.535μg，R2=0.9999，平均回收率99.13%,RSD为0.28%;和厚朴酚的线性范围为0.2500～ 1.500μg，R2=0.9998，平均回收率为99.27%,RSD为0.45%。 结论：该法简便快速，重现性好，可作为清肝利胆口服液质量控制的定量方法。

【关键词】  清肝利胆口服液; 厚朴酚; 和厚朴酚; 高效液相色谱法; 含量测定

　清肝利胆口服液是由茵陈、金银花、栀子、厚朴、防己5味中药组成的复方制剂，具有清肝利胆湿热的功效。《中国药典》2010版一部收录了该品种[1]，原标准中无厚朴的有效成分厚朴酚、和厚朴酚的含量测定项目，为了有效控制药品质量，确保该制剂的疗效，本实验采用HPLC法测定清肝利胆口服液中厚朴酚、和厚朴酚的含量[2]。

　　1 仪器与试药

　　仪器岛津高效液相色谱仪LC2010C;Sartorias电子天平(CD225D)。厚朴酚(110729200411)，中国药品生物制品检定所提供;和厚朴酚(110730200609)，中国药品生物制品检定所提供;清肝利胆口服液为市售品; 试药甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件

　　色谱柱：Agela Promosil C18 (4.6mm×100mm,5μm);流动相：甲醇乙腈水(50：20：40),检测波长为294nm;柱温为35 ℃;流速为1.0 mL·min-1;进样量20μl。

　　2.2 溶液的制备

　　2.2.1 对照品溶液的制备 精密称定经五氧化二磷减压干燥12h的厚朴酚对照品10.23mg与和厚朴酚对照品10.02mg，置200ml棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每ml含厚朴酚51.15μg，和厚朴酚 50.01μg)。

　　2.2.2 供试品溶液的制备 取本品10支,混合均匀,精密量取5ml,置10ml容量瓶中, 加甲醇稀释到刻度,摇匀, 滤过，取续滤液，即得。

　　2.3 标准曲线的绘制

　　在上述条件色谱下，精密吸取上述对照品溶液5、10、15、20、30 μL,注入液相色谱仪，测得峰面积。以对照品峰面积为纵座标,以对照品物质的量为横坐标作标准曲线，并以最小二乘法计算得回归方程：Y=63031X-1575.2，R2=0.9999，厚朴酚在0.2508～1.504 μg范围内有良好线性关系;Y=50728X-3473.4，R2=0.9998，和厚朴酚在0.2500～ 1.500μg范围内有良好线性关系 。

　　2.4 精密度试验

　　取同供试品溶液溶液,连续进样6次,结果厚朴酚RSD为0.32%(n=6),和厚朴酚RSD为0.25%(n=6)。

　　2.5 稳定性试验

　　取供试品溶液,间隔4 h进样1次,共间隔24h，结果厚朴酚RSD为1.02%(n=7),和厚朴酚RSD为1.23% (n=7)。

　　2.6 重复性试验

　　取同一批号样品6份，分别按本法处理后进行测定，结果厚朴酚平均含量为 7.12μg·ml-1,RSD为1.21%(n=6);和厚朴酚平均含量为2.54μg·ml-1, RSD为1.15%。

　　2.7 加样回收试验

　　精密量取已知含量 的清肝利胆口服6份，每份5ml，各精密加入2.2.1的对照品溶液1ml，1ml，2ml，2ml，3ml，3ml置10 mL量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,摇匀，按本法进行含量测定并计算回收率。测定结果见表1、表2。表1 样品中厚朴酚回收率试验结果表2 样品中和厚朴酚回收率试验结果表3 样品测定结果

　　2.8 样品的测定

　　精密量取3个批号供试品溶液各2份,按本法制得供试品溶液, 按本法进行含量测定结果，见表3。

　　3 讨论

　　取对照品溶液在220～360nm波长范围内扫描，在294nm波长处有最大吸收，故选择294 nm为检测波长。

　　测量厚朴中的主要成分厚朴酚、和厚朴酚方法有荧光法 、 薄层扫描法等。本方法无辅料干扰，操作简便，结果准确，可作为质量控制标准。

　　选择流动相时，分别以甲醇乙腈水(50：20：30)为流动相[3]，甲醇乙腈0.1%磷酸溶液(50：20：30)，后者分离良好且峰形较对称，故最终选择以甲醇乙腈0.1%磷酸溶液(50：20：30)为流动相。

【参考文献】
  　1 国家药典委员会.中华人民共和国药典一部.北京：化学工业出版社,2005，176.

　　2 黄明珠，王临润，寿旦.HPLC测定降脂颗粒中厚朴酚及和厚朴酚的含量.中国中药杂志，2004，29(12)：1204～1025.

　　3 郑晓英，黄威，周子平.RPHPLC法测定开胸顺气丸中厚朴酚与和厚朴酚的含量.中成药，2003，25(8)：683～684.