负载hTERT调控相关miR-138复制缺陷型腺病毒的包装及鉴定
Package and identification of replication-deficient adenovirus carrying hTERT-regulated miR-138推荐 CAJ下载 PDF下载 不支持迅雷等下载工具，请取消加速工具后下载。
【作者】 熊晓峰； 陈陵； 范亚川； 邹利全； 张方征； 王洪斌； 游斌； 刘志鹏；

【Author】 Xiong Xiaofeng,Chen Ling,Fang Yachuan,Zhou Liquan,Zhang Fangzheng,Wang Hongbing,You Bing,Liu Zhipeng(Department of Gastroenterology,324 Hospital of PLA,Chongqing 400020,China)

【机构】 解放军第三二四医院消化内科；

【摘要】 目的包装负载人端粒酶逆转录酶(hTERT)调控相关miR-138前体全长cDNA(pre-miR-138)的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-miR138)。方法 pre-miR-138全基因合成后插入腺病毒穿梭质粒(pDC315-miR138),与腺病毒包装质粒pBHGloxDel-taE1、3Cre共转染人胚肾293细胞(HEK293),包装Ad-miR138并大量扩增,收集纯化。对纯化后的Ad-miR138进行滴度测定、感染性鉴定、电镜鉴定及双引物PCR鉴定。结果包装成功的腺病毒载体具有良好的感染性,纯化浓缩后的病毒滴度可达5×1010pfu/mL。电镜可见病毒在HEK293细胞中大量复制。PCR双引物鉴定Ad-miR138可扩增出Ad及pre-miR-138特异片段,而对照Ad-LacZ只能扩增出Ad特异片段,不能扩增出pre-miR-138特异片段。结论成功包装了负载miR-138全长cDNA的复制缺陷型腺病毒载体,为进一步研究微RNAs(microRNAs)在肿瘤发生、发展中的作用,以及hTERT调控相关miR-138在肿瘤治疗中的价值奠定了基础。 更多还原

【Abstract】 Objective To construct a replication-deficient recombinant adenovirus carrying hTERT-regulated miR-138.Methods The pre-miR-138 sequence was inserted into downstream of CMV promoter of the adenoviral shuttle plasmid pDC315 in sense direction,and the recombinant plasmid pDC315-miR138 was transfected into HEK293 cell together with plasmid pBHGlox(deltaE1,3) containing adenoviral genome,then the replication-deficient recombinant adenovirus expression vector of pre-miR-138(Ad-miR138) was obtained,and... 更多还原

【关键词】 RNA指导的DNA聚合酶； 微RNAs； 人胚肾293细胞； 复制缺陷型腺病毒载体；
【Key words】 RNA-directed DNA polymerase； microRNAs； HEK293； replication-deficient adenoviral vector；

【基金】 重庆市自然科学基金资助项目(2008BB5274;2009BB5314)

【文献出处】 重庆医学, Chongqing Medicine, 编辑部邮箱 , 2011年09期 【DOI】CNKI:SUN:CQYX.0.2011-09-027 【分类号】R730.2
【参考文献】

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