【关键词】糖尿病肾病；尿微量蛋白
Combination detection of Urinary proteins in the early Diagnosis of Diabetic nephropathy
HE MinXU JianhuaLin HaibiaoWANG YunxiuHUANG XianzhangZHUANG Junhua．
（Department of Clinical Laboratoty，Guangdong Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine，Guangdong Guangzhou 510120，China）
【Abstract】Objective：To explore the clinical value of urinary proteins in early diagnosis of kidney injury in Diabetic nephropathy. Methods：The scattering turbidimetric methods were used to qualitative urine proteins in 67 subjects（48 patients with diabetic nephropathy；19 healthy controls），including urine microAlbumin（mAlb），immunoglobulin G（IgG），transferrin（TRF），a1-microglobulin（a1-MG），a2-macroglobulin（a2-MG），β2-microglobulin（β2-MG）. All statistical analyses were performed with SPSS17.0.Results：Except for a2-MG，the other 5 proteins showed higher expression levels and positive rates in diabetes group than healthy control group，and the difference was significant（P<0.05）. Conclusion：Urinary mAlb，IgG，TRF，α1-MG and β2-MG are sensitive diagnostic markers of early renal damage. Combination detection of urinary proteins has important clinical values in early diagnosis and treatment of diabetic nephropathy.
【Key words】Diabetes nephropathy；Urinary proteins
糖尿病肾病（Diabetes nephropathy，DN）是糖尿病主要的慢性并发症之一，随着糖尿病治疗水平的提高以及糖尿病患者寿命的延长，DN的发病率有增高趋势。早期诊断和及时干预对于控制其病程进展意义重大。近期许多研究表明，检测尿系列微量蛋白的排出量可作为判断肾损害的标志物。本文采用免疫散射比浊法，对尿微量白蛋白（mAlb）、免疫球蛋白G（IgG）、转铁蛋白（TRF）、a1-微球蛋白（a1-MG）、a2-巨球蛋白（a2-MG）、β2-微球蛋白（β2-MG）等指标进行检测，以探讨其对糖尿病早期肾损伤的诊断价值。
1材料和方法
1.对象收集2009年8月至2010年4月间广东省中医院门诊及住院糖尿病患者48例，平均年龄（54.6±19.8）岁。全部符合美国糖尿病协会（ADA）1997年修改的WHO诊断标准。排除肝、肾功能不全，高血压及其他肾脏疾病。正常对照（NC）组来自我院健康体检者，共19例，其中男11例，女8例，平均年龄（38.6±13.2）。尿蛋白常规检测阴性，血肌酐、尿素正常，排除肾脏病及可能影响肾功能的疾病。糖尿病组与健康对照组性别、年龄等一般临床特征无显著性差异。
2.方法 （1）仪器与试剂：德国SIMENS BNⅡ特定蛋白仪及其配套试剂及校准品，免疫散射比浊法测定；（2）检测方法：所有检测者留取随机尿及时送检，应用免疫散射比浊法测定尿液中的尿mAlb、尿IgG、尿TRF、尿α1-MG、β2-MG和a2-巨球蛋白等指标。根据仪器检测限水平，凡尿mAlb>30.0 mg/L，尿IgG> 9.6 mg/L，尿TRF>2.24 mg/L，尿α1-MG>12.0 mg/L，尿β2-MG>0.25 mg/L，尿α2-MG>9.4 mg/L为阳性。
3.计学方法
采用SPSS 17.0统计软件进行统计学处理，计量数据用平均值±标准差（Mean±SD）表示，组间比较采用t检验。检验水平α=<0.05表示差异有显著性。
2结果
2.1尿病组与对照组尿微量蛋白检测结果比较，见表一。
表一糖尿病肾病组和正常对照组尿微量蛋白检测结果
注：对照组比较＊P＜0.05 ＊＊P＜0.01。
2.2尿病患者各微量蛋白升高情况
糖尿病患者各微量蛋白升高并不是平行进行的，各项指标阳性率也不同，见表2
注：糖尿病患者的尿IgG、β2-MG、mAlb、α1-MG、α2-MG和TRF各指标>正常参考范围即为阳性。
3讨论
糖尿病肾病（DN）是糖尿病的重要慢性并发症之一，其早期肾脏损害临床症状并不明显，仅表现为尿中微量蛋白排泄的增加，5-10年间约有80％的1型糖尿病和20％的2型糖尿病患者发展为大量蛋白尿阶段。此时肾脏的病理损害已不可逆转[1]，因此选用敏感指标诊断DN对于治疗DN及降低其死亡率具有重要临床价值。
正常状态下由于肾小球的滤过功能和肾小管的重吸收功能，尿液中蛋白质含量极微。然而糖尿病患者由于长期高血糖，使非酶糖酰化速率增加，肾小球血管和肾小球基质中的葡萄糖胺聚糖浓度降低，导致血管内皮和基底膜的通透性发生障碍，使蛋白漏出。mAlb是一种带负电荷的小分子蛋白，已越来越多地用做肾组织损害的早期诊断指标，有研究认为mAlb可作为DN目前肾损害优选的早期诊断指标[2，3]。本文结果显示DN组的mAlb水平显著高于正常对照组（P<0.01），提示DN患者已经出现早期肾损伤。
TRF是相对分子质量为77 000中分子量蛋白，等电点为5.6~6.6，带负电荷。在正常情况下，由于滤过膜电荷选择性屏障的静电同性排斥作用，绝大部分的TRF不能通过滤过膜，少数率过后几乎被近曲小管吸收。由于TRF携带的阴离子电荷较白蛋白少，当其通过带负电荷的肾小球滤过膜时，受到的电荷排斥力较白蛋白较小，因此，尿TRF作为肾小球滤过功能不全的敏感指标，其升高更能反映肾小球滤过膜电荷及机械屏障的损伤[4]。我们的结果显示：DM患者尿转铁蛋白的阳性率为60.42%，与mAlb的阳性率相近，说明TRF也是DN早期损伤的敏感指标（P<0.01）。
α1-MG和β2-MG均属小分子量蛋白，分子量分别为26100、11800，正常情况下能自由通过肾小球滤过膜，约99.9％由近曲小管全部吸收[5]，但当糖尿病引起肾小球滤过膜受损或肾小管吸收功能改变时，可引起血和尿中α1-MG和β2-MG含量增加。因此对早期肾小管功能损害有重要诊断价值[6]。本研究中DM患者尿β2-MG阳性率虽然明显低于尿α1-MG，但是两者含量均显著高于NC组，与NC组相比差异有统计学意义（P<0.05），说明糖尿病早期肾损害不仅有肾小球功能损害，肾小管的重吸收功能也受损。
IgG是一种大分子量蛋白（160 000），通常不能通过肾小球滤过膜。只有当糖尿病肾脏病变较重时引起大量肾小球基底膜受损时，才会在尿液中出现。本研究中约有56.2%的DM患者尿Ig排泄量增加，提示在DN患者发病早期肾损伤时尿IgG指标已开始增高。
a2-MG 是血浆中分子量最大的蛋白质，分子量为725 000。只有当肾小球基底膜严重受损或血液成分进入尿中时，尿中a2-MG才升高[6]。本研究中DM患者尿a2-巨球蛋白含量与NC组相比差异无统计学意（P>0.05），提示在DM发病的早期，肾小球基底膜的损害较少。
本研究采用免疫比浊法检测48例DN患者尿液中6种微量蛋白的水平，发现其中5种微量蛋白的含量与健康人群比较有显著性差异（P<0.05）。提示在DN早期，不仅存在肾小球功能受损，肾小管功能也受到损害。联合检测尿液微量蛋白对于检测DN患者早期肾脏损伤有着重要临床价值。
参考文献
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[2]程苏琴，朱美财．尿微量蛋白在糖尿病肾损伤早期诊断中的价值[J]．中华检验医学杂志，2005，28（7）：740．
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[5]黄雯，王焕君，李曙远.诊断早期糖尿病肾病的敏感尿液指标[J].齐鲁检验，2003，14（5）：19-20.
[6]陈燕，赵敏，张家红等.尿微量蛋白检查对糖尿病早期肾损伤的诊断价值[J]. 中华检验医学杂志，2003，26（9）：562-564.
基金项目：广东省教育厅育苗工程项目（自然科学）（2010KT004）；广州中医药大学创新基金（10CX28）
作者简介：何敏，女，1982年生，主管技师，主要从事临床生物化学与分子生物学研究
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