H-2K~d四聚体的制备及其在检测特异性同种CTLs中的应用
Preparation of GAD/H-2K~d tetramer for specific alloreactive CTLs detection推荐 CAJ下载 PDF下载 不支持迅雷等下载工具，请取消加速工具后下载。
【作者】 陈雪玲； 严永祥； 唐婕； 翁秀芳； 吴雄文；

【Author】 CHEN Xueling,YAN Yongxiang,TANG Jie,WENG Xiufang,WU XiongwenDepartment of Immunology,Medical College,Shihezi University,Shihezi 832002,China

【机构】 石河子大学医学院免疫学教研室； 华中科技大学同济医学院免疫学系；

【摘要】 目的制备H-2Kd限制性胰岛GAD抗原肽/H-2Kd四聚体并用于检测相应的特异性同种CTL。方法以原核表达的sH-2Kd-BSP为重链,β2m为轻链,与人工合成的GAD抗原肽在体外利用稀释法进行共折叠复性得到单体。然后在BirA酶作用下对其进行生物素化,通过凝胶过滤层析法纯化生物素化的复合物单体,再与Strep-tavidin-FITC按4∶1比例混合形成四聚体;取Balb/c小鼠(H-2Kd)巨噬细胞加载胰岛GAD抗原肽,作为刺激细胞,取C3H小鼠脾细胞(H-2KK)作为效应细胞,在体外进行混合淋巴细胞培养,以获得针对H-2Kd限制性胰岛GAD抗原肽的特异性同种CTL。结果该四聚体能够与长期混合淋巴细胞培养出的同种特异性T细胞结合。结论成功构建胰岛GAD抗原肽/H-2Kd四聚体,并可用于针对H-2Kd限制性胰岛GAD抗原肽特异性同种CTL的检测。 更多还原

【Abstract】 Major histocompatibility complex(MHC) tetramer technology offers a powerful means to study specific T cell populations of interest.Our aim was to prepare GAD/H-2Kd tetramer for specific alloreactive CTLs detection.The prokaryotic sH-2Kd-BSP heavy chain and the β2m light chain were refolded by dilution method in presence of a synthetic antigenic peptide(SYQPLGDKV) to form a complex in vitro.The complex was biotinylated in presence of BirA enzyme and purified by gel-filtration chromatography,and t... 更多还原

【关键词】 GAD抗原肽/H-2Kd四聚体； 特异性CTL； 同种反应；
【Key words】 GAD/H-2Kd tetramer； Specific CTL； Allogeneic reaction；

【基金】 国家自然科学基金项目(81060227);;石河子大学人才启动基金(RCZX200829)

【文献出处】 免疫学杂志, Immunological Journal, 编辑部邮箱 , 2011年05期 【DOI】CNKI:SUN:MYXZ.0.2011-05-016 【分类号】R392.33
【参考文献】

[1] 卢小玲; 吴雄文; 翁秀芳; 李青; 梁智辉; 龚非力;   生物素化的HLA-A*2402-抗原肽复合物的制备[J]. 免疫学杂志 2006年01期

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